細胞凋亡
一、服務簡介：
凋亡細胞對所有用于細胞活性鑒定的染料如PI有抗染性，壞死細胞則不能。細胞膜有損傷的細胞的DNA可被PI著染產生紅色熒光，而細胞膜保持完好的細胞則不會有紅色熒光產生。因此，在細胞凋亡的早期PI不會著染而沒有紅色熒光信號。正?；罴毎c此相似。在雙變量流式細胞儀的散點圖上，左下象限顯示活細胞，為（FITC-/PI-）；右上象限是非活細胞，即壞死細胞，為（FITC+/PI+）；而右下象限為凋亡細胞，顯現(xiàn)（FITC+/PI-）。
二、樣本要求：
- 固定的細胞樣本：制備的單細胞懸液離心后，去除上清，加入2-3ml完全培養(yǎng)基，4℃運輸。
- 固定前細胞數(shù)量不少于2*106個/樣本。
三、實驗流程：
- 細胞收集：懸浮細胞直接收集到10ml的離心管中，每樣本細胞數(shù)為（1~5）×106/mL 500~1000r/min離心5min，棄去培養(yǎng)液。
- 用孵育緩沖液洗滌1次，500~1000r/min離心5min。
- 用100ul的標記溶液重懸細胞，室溫下避光孵育10~15min。
- 500~1000r/min離心5min沉淀細胞孵育緩沖液洗1次。
- 流式細胞儀分析：流式細胞儀激發(fā)光波長用488nm，用一波長為515nm的通帶濾器檢測FITC熒光，另一波長大于560nm的濾器檢測PI。
