淺談細(xì)胞傳代的時(shí)間問(wèn)題

　　細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中隨著細(xì)胞的不斷增殖和數(shù)量的增加，需要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，但由于培養(yǎng)皿/燒瓶空間有限和生長(zhǎng)抑制，一些細(xì)胞被阻塞。必須轉(zhuǎn)移到另一個(gè)培養(yǎng)皿/燒瓶中。確保有足夠的空間讓細(xì)胞生長(zhǎng)。但是，對(duì)于傳代的時(shí)間，很多小伙伴都掌握不好，今天，我們就主要來(lái)聊一下，細(xì)胞傳代的時(shí)間問(wèn)題。

　　什么時(shí)候進(jìn)行細(xì)胞傳代?

　　對(duì)于貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)而言，判斷是否需要傳代主要看以下2個(gè)方面：

　　? 細(xì)胞密度：

　　如果貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期未達(dá)到匯合，則需要傳代。當(dāng)正常細(xì)胞達(dá)到匯合時(shí)，增殖停止(接觸抑制)，重新接種后恢復(fù)需要時(shí)間。到達(dá)匯合處它可以繼續(xù)增長(zhǎng)，但通常會(huì)在大約兩倍的時(shí)間后惡化。同樣，懸浮培養(yǎng)中的細(xì)胞需要進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，并在未達(dá)到匯合時(shí)通過(guò)。當(dāng)達(dá)到匯合時(shí)，懸浮培養(yǎng)中的細(xì)胞凝集成團(tuán)塊，旋轉(zhuǎn)燒瓶使培養(yǎng)基混濁。

　　? 培養(yǎng)基耗竭：

　　生長(zhǎng)培養(yǎng)基 pH 值的降低通常表明乳酸的積累，這是細(xì)胞代謝的副產(chǎn)品。乳酸具有細(xì)胞毒性，降低 pH 值也是細(xì)胞增殖的不利因素。pH 值的變化率通常取決于培養(yǎng)系統(tǒng)中的細(xì)胞濃度。細(xì)胞濃度越高，培養(yǎng)基消耗得越快。

　　如果 pH 值急劇下降(> 0.1-0.2 pH 單位)且細(xì)胞濃度升高，則需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　細(xì)胞傳代時(shí)間安排

　　注意，為保證細(xì)胞生物學(xué)行為穩(wěn)定，便于監(jiān)測(cè)其健康狀況，細(xì)胞必須嚴(yán)格按預(yù)定時(shí)間傳代。

　　細(xì)胞的接種密度應(yīng)從特定的接種密度逐漸調(diào)整，直至達(dá)到穩(wěn)定的生長(zhǎng)速度和合適的細(xì)胞產(chǎn)量。細(xì)胞偏離這種確定的生長(zhǎng)模式通常表明細(xì)胞的健康狀況不佳(退化、污染等)或者培養(yǎng)體系的某一組分功能異常 (例如：未達(dá)到好的溫度，培養(yǎng)基過(guò)于陳舊)。

　　保留詳細(xì)的細(xì)胞培養(yǎng)記錄，記錄飼養(yǎng)和傳代時(shí)間、使用的培養(yǎng)基類型、解離方法、接種率、形態(tài)觀察、接種濃度、產(chǎn)量和抗生素使用情況。我強(qiáng)烈推薦它。

　　最好根據(jù)通過(guò)時(shí)間安排進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和其他非常規(guī)操作(如更換介質(zhì)類型)。如果實(shí)驗(yàn)的放置與傳統(tǒng)的傳代時(shí)間安排不匹配，則有必要確保細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)。如果達(dá)到停滯期或匯合期，它將停止。它不會(huì)在生長(zhǎng)過(guò)程中通過(guò)。