詳細介紹如何繪制細胞生長曲線？

　　一個典型的細胞生長曲線可以分為四個部分：潛伏期、指數生長期、平頂期和退行性老化，其中三個不同的生長期(潛伏期、指數生長期、平頂期)是每個細胞系所共有的特征。通過測量增殖曲線，我們了解培養(yǎng)細胞生物學特性的基本參數，確定細胞增殖的絕對數，確定細胞活力，而且也可用于測定藥物等外來因素對細胞生長的影響。

　　1.實驗材料

　?、偈筇コ衫w維細胞或雞胚胎成纖維細胞，完全DMEM培養(yǎng)基，0.25%胰脂肪酶。

　?、?24孔板細胞培養(yǎng)板、移液管、吸球、超凈工作臺、倒置顯微鏡、細胞計數板。

　　2.操作步驟

　　①收集增殖狀態(tài)良好的小鼠胎兒成纖維細胞或雞胚胎成纖維細胞，用胰蛋白酶消化。

　?、谟肈MEM制備細胞懸液。計算細胞數后，將細胞濃度調整為 (1-5) x 104 個細胞/mL，并將細胞準確接種到兩個 24 孔板中。添加到每個孔中的細胞總數和數量應該相同。添加的培養(yǎng)基量應相同。

　?、勖刻煜?孔細胞，計算細胞數，計算平均值。 通常，您需要連續(xù)計算大約 10 天。從培養(yǎng)開始，未計數的細胞應每 3 天更換一次。

　?、芤耘囵B(yǎng)時間為橫軸，細胞濃度為縱軸，將每天獲得的細胞濃度寫在方格紙上，并連點得到細胞增殖曲線。

　　3.注意事項

　?、偌毎臃N濃度不宜過高或過低。在適當的濃度下，細胞將在 7-10 天內生長而不會受到生長抑制。如果小區(qū)數量太少，小區(qū)適應周期就會太長。如果數量過多，細胞很快就會進入穩(wěn)定增值期，需要在一定時間內傳代，曲線不能準確反映細胞的生長情況。應在相同接種密度下連續(xù)測定同種細胞的生長曲線進行縱向比較。不同的細胞應接種相同數量的細胞進行比較。

　?、诩毎鲋城€是觀察細胞增殖基本規(guī)律的重要方法。只有具有獨特和穩(wěn)定增殖特性的細胞才能用于實驗觀察細胞增殖的變化。因此，確定生長曲線是觀察細胞系細胞和未建立細胞生長特性的最基本指標。

　?、奂毎L曲線最常用，但其反映值可能不夠準確，存在20%～30%的誤差，需結合其他指標進行分析。生長曲線上細胞數加倍所需的時間稱為細胞倍增時間，可由曲線計算。細胞倍增時間間隔是細胞的指數生長期，大多數細胞傳代、冷凍等實驗都應在此間隔進行。

　?、懿煌囵B(yǎng)物中細胞的細胞生長曲線和細胞倍增時間可以直接反映培養(yǎng)物中細胞的生長速度，是選擇培養(yǎng)物的主要依據。相同培養(yǎng)基中細胞生長曲線的差異為成纖維細胞和上皮細胞選擇最合適的培養(yǎng)基。

　　⑤通過繪制細胞生長曲線，可以比較不同培養(yǎng)基對細胞生長曲線變化的影響。如果條件允許，我們會分析在培養(yǎng)基中加入各種生物活性物質(生長因子、激素等)對細胞增殖的影響，以選擇合適的細胞培養(yǎng)基。