列舉細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的兩大原因

　　就一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言無(wú)論運(yùn)作的多么好，總會(huì)因?yàn)楦镄录夹g(shù)或拓展方向二影響原來(lái)的流程，從而產(chǎn)生各種各樣的問(wèn)題。有些地方錯(cuò)誤的操作有可能帶來(lái)嚴(yán)重的后果，那么今天主要列舉細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的兩大原因。

　　一、培養(yǎng)體系出現(xiàn)問(wèn)題

　　1.檢查你所培養(yǎng)的細(xì)胞是否存在污染。

　　(1)如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素，細(xì)胞污染則是不可避免的。

　?、佟∮萌庋酆惋@微鏡進(jìn)行檢查。

　?、凇∪绻?xì)胞被污染則要棄掉。

　　(2)由于支原體污染不容易覺(jué)察到，因此必須定期檢測(cè)。

　　(3)檢測(cè)可能污染的途徑和原因。

　　2. 檢查細(xì)胞生長(zhǎng)所用的培養(yǎng)基和血清(例如，不同批次或不同制造商)。如果您每天使用粉末或 10x 防腐劑，并將您當(dāng)前購(gòu)買(mǎi)的培養(yǎng)基更換為 1x 液體，您會(huì)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題是由這個(gè)引起的。

　　3.如果問(wèn)題與介質(zhì)無(wú)關(guān)，則可能仍然是蜂窩問(wèn)題。

　　(1) 復(fù)蘇另一個(gè)冷凍保存的細(xì)胞，并將其與培養(yǎng)中的細(xì)胞進(jìn)行比較。應(yīng)將兩種類(lèi)型的細(xì)胞的培養(yǎng)物分開(kāi)，以避免在培養(yǎng)開(kāi)始時(shí)受到污染。然后，按照步驟 (2) 至 (4) 檢查以下內(nèi)容：

　　(2) 對(duì)傳代細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，繪制生長(zhǎng)曲線，與上次培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，確認(rèn)以下變化。

　?、佟鞔鷷r(shí)是否接種密度過(guò)低。

　?、凇〖?xì)胞傳代是否過(guò)于頻繁。

　　③　傳代前細(xì)胞平臺(tái)期是否過(guò)長(zhǎng)。

　　(3)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號(hào)，檢查批號(hào)和供貨商。

　　(4)是否細(xì)胞分離過(guò)程中嚴(yán)重?fù)p傷了細(xì)胞，應(yīng)檢測(cè):

　?、佟∫鹊鞍酌?其他消化試劑)消化時(shí)間是否過(guò)長(zhǎng)。

　?、凇∠旱臐舛群突钚允欠襁^(guò)高、過(guò)強(qiáng)。

　　③　胰蛋白酶消化時(shí)，孵箱溫度是否過(guò)高。

　?、堋〈荡蛳?xì)胞時(shí)是否過(guò)于用力。

　?、荨〖?xì)胞是否對(duì) EDTA過(guò)于敏感(如果添加了EDTA)。

　?、蕖∫鹊鞍酌赶♂屖欠裼姓`。

　?、摺∈欠袷褂昧艘慌淤|(zhì)的胰蛋白酶消化液。

　　二、檢查共用的設(shè)備和試劑

　　溫室和孵箱溫度

　　(1)溫度和溫度設(shè)定不準(zhǔn)。

　?、佟∽詣?dòng)調(diào)溫器損壞。

　?、凇￠_(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。

　　③　孵箱門(mén)未關(guān)緊。

　　④　風(fēng)扇損壞造成散熱不均。

　　(2)孵箱濕度不能維持

　?、佟∷P(pán)中未加水。

　?、凇》跸溆袧B漏。

　　③　開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。

　?、堋≡赑etri培養(yǎng)皿中放置一定量的PBSA，每日稱(chēng)重，以檢查蒸發(fā)率。

　　(3)孵箱的CO2濃度不準(zhǔn)

　?、佟￠_(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。

　?、凇O2控制器出現(xiàn)問(wèn)題。