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2025-03-24
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介紹下細(xì)胞株的保存與操作方法1
發(fā)表時(shí)間：2021-07-20 11:36 關(guān)于有些人總是會(huì)遇到養(yǎng)的細(xì)胞形狀怎樣都欠好的問(wèn)題。這個(gè)其實(shí)是有一個(gè)方法可以改善的。下面原代細(xì)胞廠家的小編就來(lái)介紹下細(xì)胞株的保存與操作方法。
1、紫外線消毒30分鐘后，關(guān)閉紫外線燈管，在正常操作條件下打開(kāi)超凈臺(tái)，用酒精對(duì)操作者的手進(jìn)行消毒。 2、確認(rèn)瓶身干凈后，將必要的培養(yǎng)液和胰酶放在工作臺(tái)面上，點(diǎn)燃酒精燈，用酒精棉球擦拭培養(yǎng)液和胰酶瓶口，再將瓶口對(duì)準(zhǔn)在酒精燈上消毒2-3次。擰開(kāi)瓶蓋，重新對(duì)瓶口和瓶蓋進(jìn)行消毒，然后將它們放在酒精燈的兩端。特別是將栽培基瓶放在傾斜的架子上，將瓶口對(duì)準(zhǔn)酒精燈，靠近酒精燈放置，將瓶蓋放在酒精燈的對(duì)面。 3、用酒精燈對(duì)培養(yǎng)瓶的瓶口消毒2-3次，將瓶口和瓶蓋各松開(kāi)2-3次，將瓶蓋放在酒精燈的右側(cè)，掛起來(lái)。培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液進(jìn)入臟水槽，用酒精燈對(duì)瓶口消毒2-3次，直立放好。取 1 ml 移液管，在酒精燈上快速旋轉(zhuǎn) 1-2 次進(jìn)行消毒，然后接上移液器吸頭，加入 1.5 ml 胰脂肪酶溶液，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中。 4. 隔著瓶壁培養(yǎng)細(xì)胞層，培養(yǎng)胰脂肪酶約40秒，立即站在光照下檢查細(xì)胞和一兩個(gè)掉落的細(xì)胞之間的孔狀間隙。這是胰脂肪酶的好時(shí)機(jī)。如果您看到細(xì)胞碎片從瓶壁上掉下來(lái)，那是由于胰蛋白酶消化過(guò)度。如果您沒(méi)有看到孔狀裂縫或細(xì)胞掉落，則應(yīng)繼續(xù)消化并輕輕平放培養(yǎng)瓶。胰蛋白酶可以使細(xì)胞層下沉 1 秒鐘，然后主動(dòng)勃起檢查細(xì)胞在光線下的狀況。這可以重復(fù)幾次，直至呈現(xiàn)針孔樣縫隙和1-2個(gè)細(xì)胞掉落的消化狀況。用移液器將胰酶吸凈。 5. 將 1 ml 冷凍保存液放入培養(yǎng)瓶中，并用移液器加入少量培養(yǎng)基。輕輕反復(fù)沖洗培養(yǎng)瓶壁 5-8 次，使附著的細(xì)胞完全落下。孵育培養(yǎng)基并輕輕移液 2-3 次，以盡可能將細(xì)胞保持在單一懸浮液中。 6. 將 1 ml 含有細(xì)胞的冷凍保存液轉(zhuǎn)移到新的種子管中并蓋上蓋子以創(chuàng)建實(shí)驗(yàn)符號(hào)。 7. 將培養(yǎng)瓶口和瓶蓋消毒2-3次，然后擰緊，關(guān)閉酒精燈，抬起實(shí)驗(yàn)室工作臺(tái)，取出實(shí)驗(yàn)試劑及污缸等，封閉超凈作業(yè)臺(tái)。 8、將種管放入4℃冰箱30分鐘，取出放入-20℃冰箱過(guò)夜，-80℃冰箱3-4天。第二天，儲(chǔ)存在-196°C的液氮中。長(zhǎng)期儲(chǔ)存。 |
