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購買到原代細胞之后應該注意什么4
發(fā)表時間：2021-06-15 08:53 原代細胞是從體內(nèi)取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人將培養(yǎng)的一代細胞和10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞直觀的理解就是不能無限繼承。我們建議您使用 P2-P3 代完成實驗，無論您是自己提取細胞還是從試劑公司購買細胞。因此，提取和培養(yǎng)原代細胞并盡可能多地保持良好細胞狀態(tài)的技能對實驗的成敗至關(guān)重要。那么對已經(jīng)購買的細胞之后應該注意什么注意事項呢。
1. 接收細胞時，在顯微鏡下觀察是否有污垢。在收到細胞前幾天，在各種放大倍數(shù)下拍照，在顯微鏡下記錄以防止細胞問題，可以跟公司很好地溝通。 2. 收到細胞后不要立即處理。將其放入培養(yǎng)箱中并放置 4 小時或更長時間，然后再操作。如果你不著急，可靜置過夜。 3. 細胞一次傳代，需要增加細胞密度才能傳代。原代細胞傳代密度低，難以增殖。建議告訴1：2-1：3。 4.原代細胞(內(nèi)皮細胞、貼壁細胞等)傳代后，0.25%+0.53nM胰蛋白酶處理，1ml消化液37度培養(yǎng)箱30秒，5ml培養(yǎng)基(貼壁細胞正常消化，用量我們用胰蛋白酶和培養(yǎng)基為 1:1，但原代細胞需要用大量培養(yǎng)基中和)。 5. 不建議冷凍原代細胞，因為冷凍保存容易導致復活失敗。如果您想凍結(jié)，我們建議在 P2 或 P3 代凍結(jié)。冷凍溶液中的血清越多越好。推薦比例為 9(血清)：1(DMSO)。 6. 待原代細胞復蘇后，將細胞在37-38度水浴中解凍，加入10ml培養(yǎng)基(此比例也可用于復蘇正常貼壁細胞，復蘇存活率顯著提高)，離心重懸鋪板。 |
